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乳糖不耐受診斷方法以臨床癥狀為主，可進行小腸功能激發(fā)試驗和大便酸性實驗，可試用無乳糖配方。如果癥狀緩解，則提示乳糖不耐受，亦可與牛奶過敏相鑒別。牛奶過敏兒童進食無乳糖配方，無癥狀緩解，部分嬰兒可用，兩者均存在的情況。特殊情況可輔以實驗室檢查，如空腸活檢與酶測定、乳糖耐量試驗、乳糖氫呼氣試驗等，乳糖不耐受的臨床表現(xiàn)，主要是一組綜合癥狀，可在進食乳糖制品三十分鐘或兩小時出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹脹、腹瀉、腹痙攣痛、腸鳴音異常等小腸刺激癥狀。臨床癥狀的嚴(yán)重程度與攝入乳糖量有關(guān)，多數(shù)人可耐受一定量的乳糖。
實驗時常用的方法小腸功能激發(fā)試驗，即進食稍高于正常攝入量的乳糖制品，觀察癥狀出現(xiàn)的時間，一般乳糖酶缺乏的癥狀出現(xiàn)時間為三十分鐘或兩小時。氫呼出實驗，胃消化的乳糖到達(dá)結(jié)腸與細(xì)菌作用產(chǎn)生氫氣，擴散入血后從肺呼出，臨床上檢測呼出氣體的氫氣，即乳糖氫呼氣試驗，作為診斷乳糖不耐受和乳糖吸收不良的金標(biāo)準(zhǔn)。還有糞便還原物質(zhì)檢測、糞便酸性試驗。乳糖不耐受時結(jié)腸的細(xì)菌分解乳糖，產(chǎn)生酸性物質(zhì)，糞便pH值小于5.5，提示乳糖不耐受。該方法簡單為非極性，嬰幼兒與家長的依從性較好。還有小腸活檢、基因的診斷等等。